|
Tiivistelmä: Koska käytössä olevat transgenoottisten kasvien tuottotavat johtavat mosiikkisiin solukoihin, kalluksiin tai kasviyksilöihin, olisi hedelmöityksen mukana tapahtuva transgenoosi edullinen. Tällaisessa hedelmöitysvälitteisessä transgenoosissa todennäköisesti päädytään yhtenäiseen transgeneettiseen tsygoottiin ja jälkeläiseen. Onnistuneiksi luonnehdittuja kokeita oli työn alkaessa kuvattu puuvillalla, herneellä, riisillä ja vehnällä. Vehnäkokeissa oli käytetty Agrobacterium-Ti-plasmidia hyväksi. - Työssä on tarkoitus tutkia Agrobacterium-infektion mahdollisuutta erityisesti ohran hedelmöityksen yhteydessä, kun Ti-plasmidissa on GUS-merkkigeeni ja käsittelyt tehdään emaskulaation jälkeen kontrolloiduissa olosuhteissa. Ensimmäisessä koesarjassa käsittelin yhteensä 2769 ohran kukkaa. Näistä syntyi 1731 jyvää, eli käsittelyn aiheuttama fertiilisyyden alennus oli noin 35%. Osa saaduistasiemenistä tutkittu edelleen. Todennäköiset Ti-DNA:n kantajat erottelin ja ne kasvatettiin edelleen tissue print-DNA-hybridisaation perusteella, jonka tein itujen ollessa parin senttimetrin mittaisia. Yksi tissue print-positiiviseksi luokiteltu ekspressoi merkkigeeniä siitepölyssään. Totesin kuitenkin merkkigeenin ekspression vaimentumisen (gene silencing) seuraavan polven kasveissa. Tämä saattaa efektiivisesti olla myös siirtyneen geenin eliminaatiosta johtuva. Lisäksi syntyi eräästä lajikkeesta subletaaleja, itämisen aikana kuolevia kasveja, joiden alkion solukoissa sytokemiallisesti totesin GUS-merkkigeenin aktiivisuuden. Näitä ei syntynyt yhtään tämän lajikkeen kontrollitähkistä. Ero on tilastollisesti merkitsevä. Käytännön kannalta saattaa trangenoosifrekvenssi olla ohralla riittävän korkea tällä menetelmällä, mutta geenin vaimentuminen alentanee käyttökelpoisten transgeneettisten kasvien saantia. (Työn kestäessä yhteneväisiä gene silencing-tuloksia julkaistiin ohrasta samantapaisella Agrobacterium-menetelmällä muualta.) Kokeeseen on liittynyt myös omien Agrobasterium-isolaattien karakterisointi. Raidan (Salix caprea) varhaiskevään kukkatumoreista eristämäni kaksi Agrobacterium-kantaa sisältävät odotetun kokoisen plasmidin, jonka olen todennut eroavan kontrollina käytetyn Agrobacterium Ti-plasmidista restriktioendonukleaasi-fragmentaationsa puolesta. Kantojen opiniityyppi on tuntematon. Nämä kukkaspesifiset kannat saattaisivat olla erikoistuneita myös hedelmöitysvälitteiseen transgenoosiin. - Myös muiden todettua ja julkaistua epastabiilisuuksia ohrassa, tutkin jatkossa hedelmöitymisvälitteisen transgenoosin optimointia tupakalla (Nicotiana tabacum) ennen metodin soveltamista muihin viljelykasveihin.
Vastaava tutkija
Ahokas, Hannu Hankkeen kesto 1992 - 1999
Asiasanat
Agrobacterium spp., gene silencing, Hordeum vulgare, Nicotiana tabacum, ohra, Salic caprea, transgenoosi, tupakka
Hankkeen vaihe: Päättynyt
HUOM! Tämä tutkimushankekuvaus on tuotettu Hankehaaviin Maa- ja elintarviketalouden tutkimuskeskuksen tutkimustietojärjestelmästä, jota ei enää ylläpidetä. Tarkista ajantaiset tutkimushanketiedot Luonnonvarakeskus Luken järjestelmästä.
|
